بررسی ویروس s سیب زمینی در شمال خراسان

در بررسی که در سال 1375 به منظور یافتن ویروس s سیب زمینی در مزارع سیب زمینی شمال خراسان انجام شد. تعدادی غده بطور انتخابی از چندین مزرعه سیب زمینی در اطراف بجنورد از بوته های علامت گذاری شده که دارای علائم موزائیک ، روگوز، فرورفتنی رگبرگها، ریزبرگی، تموج حاشیه برگها بودند جمع آوری گردید. هم چنین تعدادی غده نیز بطور تصادفی از مزارع سیب زمینی اطراف شهرهای مشهد، چناران، قوچان، فاروج و شیروان جمع آوری شد. غده های جمع آوری شده تا سپری شدن دوره خواب در 4 درجه سانتیگراد نگهداری شده و سپس در شرایط گلخانه کشت داده شدند. در مطالعات دامنه میزبانی، ویروس موردنظر گیاهان nicotiinan debneyi domin. و lycopersicon esculentum l. cv. early urbana iii را بطور سیستمیک آلوده نمود. این ویروس در روی گیاهان chenopodium amaranticolor costa & reyn. و c. quinoa wild علائم موضعی کلروتیک ایجاد نمود ولی در phaseolus vulgaris l. var red kidney, gompherena globosa l., petunia hybrida vilm, nicotiana tabacum l. cv. xanthi, datura stramonium l. و capsicum frutescens l. هیچگونه علائمی ایجاد نکرد. ایزوله مورد نظر در n.debneyi تکثیر داده شد و خالص سازی آن طبق روش پیشنهادی hammond & lawson (1988) با مقداری تغییرات انجام گرفت . آنگاه در برابر پرپاراسیون نسبتا خالص شده ویروس آنتی سرم تهیه گردید. براساس واکنش گیاهان محک افتراقی و میکروسکپ الکترونی، عامل بیماری ویروس s سیب زمینی تشخیص داده شد. از آزمونهای سرلوژیکی "نشت دوطرفه در آگار" و "elisa" جهت سرولوژی ویروس استفاه شد. جهت تعیین میزان آلودگی مزارع سیب زمینی اطراف بجنورد مجموعا 200 بوته به طور تصادفی نمونه برداری شده و از آزمون das-elisa جهت تشخیص pvs در آنها استفاده شد، براساس نتایج آزمون درصد آلودگی در منطقه بجنورد 15/5 درصد تعیین شد. جهت تشخیص پروتئین پوششی ویروس ، الکتروفورز روی ژل 15 درصد sds-page و سپس western blotting انجام شد. مقایسه نتایج الکتروفورز با وسترن باتینگ نشان داد که دو باند پروتئنی مربوط به پروتئین های ویروسی با وزنهای مولکولی 31 و 26 کیلو دالتون می باشد. پروتئین 31 کیلودالتونی به عنوان پروتئین پوششی ویروس 26 کیلودالتونی به عنوان یکی از محصولات پروتئینی rna ویروس s سیب زمینی که در سلولهای آلوده میزبان تولید می شوند، تشخیص داده شد.